Ta Buffer se uporablja za preučevanje DNA gibanja
Ta pufer ima nizko ionsko moč in nizko pufersko kapaciteto. Najbolj primerna je za elektroforezo velikih (> 20 kb) kosov DNK in jo bo treba pogosto zamenjati ali ponovno krožiti v daljših časih (> 4 ure) gela.
S tem v mislih, boste morda želeli razmisliti o več serijah puferja.
Glede na to, da je pufer enostaven za uporabo in da se koraki lahko izvedejo hitro, zaradi česar več kot ena serija hkrati ne bi smela biti posebej dolgotrajen ali težko potegniti. Z uporabo spodnjih navodil je potrebno narediti TAE-buffer le 30 minut. Evo kako:
Pripravite osnovno rešitev EDTA
Pred tem je pripravljena raztopina EDTA (etilendiamin tetraocetna kislina). EDTA ne bo popolnoma prešla v raztopino, dokler se pH ne nastavi na približno 8,0. Za 500-mililitrsko osnovno raztopino 0,5 M EDTA natehtamo 93,05 g dinatrijeve soli EDTA (FW = 372,2). Raztopimo v 400-mililitrski deionizirani vodi in naravnamo pH z natrijevim hidroksidom (NaOH). Raztopino dopolnite do končne prostornine 500 mililitrov.
Bič Up Na zalogi rešitev TAE
Napravimo koncentrirano (50-kratno) osnovno raztopino TAE, s tehtanjem 242 gramov baze Tris (FW = 121,14) in raztapljanjem v približno 750 mililitrov deionizirane vode.
Previdno dodamo 57,1 mililitrov ledene kisline in 100 mililitrov 0,5 M EDTA (pH 8,0). Nato nastavite raztopino na končno količino 1 litra. To osnovno raztopino lahko shranimo pri sobni temperaturi. PH tega puferja ni prilagojen in bi moral biti približno 8,5.
Pripravite delovno rešitev TAE
Delovna raztopina 1x TAE pufera je narejena tako, da se osnovna raztopina razredčiti za 50 x v deionizirani vodi.
Končne koncentracije topil so 40 mM. Tris-acetat in 1 mM EDTA. Buffer je zdaj pripravljen za uporabo pri teku z agaroznim gelom.
Kaj potrebujete za pufer
Ker izdelava TAE pufra zahteva samo hiter in enostaven nabor navodil, število materialov, potrebnih za to, ni pretirano. Potrebovali boste samo EDTA dinatrijevo sol, baza Tris in ledocetno kislino.
Priprava pufra zahteva tudi merilnik pH in kalibracijske standarde. Potrebovali boste tudi 600 mililitrov in 1500 mililitrov čaše ali bučke, pa tudi graduirane cilindre. Končno boste potrebovali deionizirano vodo, premešali palice in premešali plošče.
Zavijanje
Kje nameravate narediti varnostni pas - na šolski strani, delovnem mestu ali na drugem kraju, na primer v vašem domu? Preverite inventar, preden začnete preverjati, ali imate vse zgornje materiale za varnostni pano TAE.
Če ne želite plačati za materiale, se priporoča, da se varnostni pas izven svojega doma priporoči. Lahko enostavno naročite materiale, ki jih potrebujete na spletu, ali pa obiščite specialno trgovino zanje.