Kako narediti ta imunohistokemični pufer
Fosfatna pufrana solna sol (PBS) je puferska raztopina, ki se običajno uporablja za imunohistokemično (IHC) barvanje in se pogosto uporablja pri bioloških raziskavah. PBS je vodna raztopina soli, ki vsebuje natrijev hidrogenfosfat, natrijev klorid in v nekaterih primerih kalijev klorid in kalijev dihidrogenfosfat.
Imunohistokemično obarvanje
Imunohistokemija se nanaša na postopek odkrivanja antigenov, kot so proteini, v celicah tkivnega dela z uporabo načela protiteles, ki se specifično vezujejo na antigene v bioloških tkivih.
Imunofluorescijsko obarvanje je bila prva metoda imunohistokemične obarvanja.
Antigeni postanejo vidni, ko so konjugirani s protitelesi z uporabo fluorescenčnih barvil zaradi antigenske vezave reakcije. Ta proces se pojavi, ko ga aktivira z razburljivo svetlobo določene valovne dolžine pod fluorescentnim mikroskopom.
Osmolarnost in ionske koncentracije raztopin ustrezajo tistemu človeškega telesa - so izotonični.
Recept za PBS
PBS lahko pripravite na več načinov. Obstaja več formul. Nekateri med njimi ne vsebujejo kalija, drugi pa vsebujejo kalcij ali magnezij .
Ta recept je razmeroma enostaven. Za 10X PBS osnovno raztopino (0,1M). Vendar pa lahko naredite tudi 1X osnovno raztopino ali začnete s tem 10X receptom in jo razredčite na 1X.
Celoten postopek traja približno 10 minut.
Na voljo je tudi možnost, da dodate Tween.
Kaj boste morali narediti PBS Buffer
- Natrijev fosfat monobazni (brezvodni)
- Dibazni natrijev fosfat (brezvodni)
- Natrijev klorid
- Tehtajte in stehtajte čolne
- Magnetno mešalo in mešalo
- PH sondo, ki je kalibrirana in ustrezne rešitve za prilagajanje pH
- 1L merilna bučka
- Tween 20 (neobvezno)
Kako narediti fosfatne puferske soline (PBS)
Natehtamo 10,9 g brezvodnega natrijevega fosfatnega dibazičnega (Na2HPO4), 3,2 g brezvodnega natrijevega fosfata monobaznega (NaH2PO4) in 90 g natrijevega klorida (NaCl).
Raztopite v tekočini pod 1 L destilirane vode.
PH naravnamo na 7,4 in raztopino dopolnimo do končnega volumna 1L.
Razredčite 10X pred uporabo in po potrebi popravite pH.
Lahko pripravite raztopino PBS, ki vsebuje 0,5 odstotka Tween 20, tako da dodate 5 ml Tween 20 v 1L raztopino.
Nasveti za izdelavo PBS Buffer
Shranjujte pufer na sobni temperaturi, potem ko ste pripravili rešitev PBS.
Ne-brezvodni reagenti so lahko zamenjani, vendar boste morali preračunati ustrezno maso vsakega, da bi se prilagodili molekulam dodane vode.
Uporaba fosfatne puferske soline (PBS)
Raztopina s fosfatnim pufrom ima veliko uporab, ker je za večino celic izotonična in nestrupena. Uporablja se lahko za razredčenje snovi in se pogosto uporablja za spiranje vsebnikov celic. PBS se lahko uporablja kot razredčilo v različnih metodah za sušenje biomolekul, ker bodo molekule vode v njej na primer strukturirane okoli snovi-beljakovin. To bo "posušeno" in imobilizirano na trdno površino.
PH ostaja stabilen in dosleden, da preprečuje uničenje celic.
Tanka folija vode, ki se veže na snov, preprečuje denaturacijo ali druge konformacijske spremembe. Karbonatni odbojniki se lahko uporabljajo za isti namen, vendar z manj učinkovitosti.
PBS lahko uporabimo tudi za določanje referenčnega spektra pri merjenju adsorpcije beljakovin v elipsometriji.