Te blažilnike lahko uporabimo za biološke aplikacije pri skoraj nevtralnem pH
Tri vrednosti pKa za fosforjevo kislino (iz priročnika za kemijo in fiziko CRC) so 2.16, 7.21 in 12.32. Mononatrijev fosfat in njegova konjugirana baza, dinatrijev fosfat, se običajno uporabljajo za ustvarjanje puferov pH vrednosti okoli 7, za biološke uporabe, kot je prikazano tukaj.
Ustvarjanje tega medpomnilnika je malo težje kot ustvarjanje odbojnikov TAE in TBE. Vendar ni izredno težko. Preprosto povprečno. Za to blažilnico bi morali trajati približno 10 minut. Evo kako.
1. Odločite se o lastnostih puferja
Preden naredite pufr, morate najprej vedeti, kakšno molarnost želite, kakšen obseg želite narediti in kakšen je želeni pH. Večina puferov najbolje deluje pri koncentracijah med 0,1 M in 10 M. pH mora biti v 1 enoti pH kisline / konjugatne baze pKa. Za enostavnost bo ta vzorec izračunan za 1 liter puferja.
2. Določite razmerje med kislino in bazo
Uporabite enačbo Henderson-Hasselbalch (spodaj), da ugotovite, kakšno razmerje kisline in baze je potrebno za izdelavo puferja želenega pH-ja. Uporabite vrednost pKa, ki je najbližja želenemu pH, razmerje pa se bo nanašalo na kondenzacijski par kisline, ki ustreza tisti pKa.
HH enačba: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
Za pufer s pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0,4898
Namestite [Acid] in Solve for [Base]
Želena molarnost pufra je vsota [kisline] + [osnove].
Za 1 M pufer, [Base] + [Acid] = 1 in [Base] = 1 - [Acid]
Če ga zamenjamo v enačbi razmerja, iz 2. koraka dobite:
[Kislina] = 0,6712 molov / L
Rešite za [Acid]
Z uporabo enačbe: [Base] = 1 - [Acid] lahko izračunate, da:
[Base] = 0,3288 molov / L
3. Mešajte kislo in konjugatno osnovo
Ko uporabite enačbo Henderson-Hasselbalch za izračun, kakšno razmerje med kislino in bazo je potrebno za vaš pufer, pripravite nekaj manj kot 1 liter raztopine z uporabo pravilnih količin mononatrijevega fosfata in dinatrijevega fosfata.
4. Preverite pH
Uporabite pH sondo, da potrdite, da je dosežen pravilen pH za pufer. Po potrebi naravnamo z uporabo fosforne kisline ali natrijevega hidroksida (NaOH).
5. Popravite količino
Ko dosežete želeni pH, povečajte količino puferja na 1 liter. Nato po želji razredčimo pufer. Ta isti pufer lahko razredčimo, da ustvarimo odbojnike 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M ali kaj drugega.
6. Nasveti za Buffer
Ne pozabite, da se pKa enostavno ne meri z natančno vrednostjo. Nekoliko drugačne vrednosti so lahko na voljo v literaturi iz različnih virov.
7. Kaj potrebujete
Za izdelavo varovala potrebujete tri snovi, preostali material pa je oprema. Snovi so mononatrijev fosfat, dinatrijev fosfat in fosforna kislina ali natrijev hidroksid, da se prilagodi pH.
Potrebovali boste tudi merilnik pH in sondo ter ustrezno laboratorijsko programsko opremo. To vključuje merilno bučko, graduirane cilindre, čaše in mešalne palice.
Nazadnje, potrebovali boste mešalno kuhalno ploščo.