Ta pufer se uporablja za ločevanje elektroforeze DNA
TBE pufer je še posebej uporaben za ločevanje manjših fragmentov DNA (MW <1000), kot so majhni produkti digestivnih encimov za omejevanje .
TBE ima večjo pufersko zmogljivost in daje ostrejšo ločljivost kot TAE pufr . TAE pufer je raztopina, ki jo sestavljajo baza Tris, ocetna kislina in EDTA (Tris-acetat-EDTA).
TBE je na splošno dražji od TAE in zavira DNA ligazo, kar lahko povzroči težave, če so namenjeni naslednji postopki čiščenja DNA in ligacije. S tremi preprostimi koraki, ki sledijo, se naučite, kako narediti TBE pufer. Za ustvarjanje tega medpomnilnika ne bi smelo trajati več kot približno 30 minut. Evo kako:
Pripravite osnovno rešitev EDTA
Pred tem je treba pripraviti raztopino EDTA (etilendiamin tetraocetne kisline). EDTA ne bo popolnoma prešla v raztopino, dokler se pH ne nastavi na približno 8,0. Za 500-mililitrsko osnovno raztopino 0,5 M EDTA natehtamo 93,05 g dinatrijeve soli EDTA (FW = 372,2). Nato ga raztopimo v 400 mililitrih deionizirane vode in naravnamo pH z NaOH. Po tem raztopino dopolnimo do končne prostornine 500 mililitrov.
Pripravite osnovno rešitev TBE
V koncentrirano (5x) osnovno raztopino TBE tehtamo 54 g Trisove baze (FW = 121,14) in 27,5 g borove kisline (FW = 61,83) in raztopimo tako v približno 900 mililitrih deionizirane vode. Nato dodamo 20 mililitrov 0,5 M EDTA (pH 8,0) in raztopino nastavimo na končno količino 1 litra.
To raztopino lahko shranimo pri sobni temperaturi, vendar se bo oborina oblikovala v starejših raztopinah. Shranjevalnik hranite v steklenicah in zavrzite, če je nastala oborina.
Pripravite delovno rešitev TBE
Za elektroforezo agaroznega gela se lahko uporabi pufr TBE pri koncentraciji 0,5x (razredčenje koncentriranega materiala 1:10). Raztopino osnovnega raztopine razredčite za 10x v deionizirani vodi. Končne koncentracije so 45 mM Tris-borata in 1 mM EDTA. Buffer je zdaj pripravljen za uporabo pri teku z agaroznim gelom .
Kaj rabiš
Če želite, da bo TBE pufer, boste potrebovali samo štiri snovi. Preostale točke na tem seznamu so oprema. Štiri potrebne snovi so dinatrijeva sol EDTA, baza Tris, borna kislina in deionizirana voda.
Kar zadeva opremo, boste potrebovali pH meter in kalibracijske standarde, kot je primerno. Poleg tega boste potrebovali čaše s 600 mililitrih ali 1500 mililitrov ali bučke. Zaokroževanje vaših potreb po opremi so graduirani cilindri in mešanje palic in premešamo plošče.
Preverite inventar v laboratoriju, ki ga boste uporabljali, da se prepričate, da imate vse, kar potrebujete, preden začnete. Nič ni slabše, kot da bi se morali ustaviti sredi priprave rešitve, ker ste zmanjkali ustreznih materialov.
Če je vaš laboratorij v šoli ali na delovnem mestu, preverite pri ustreznem osebju, da imajo vse elemente na zalogi. Tako lahko prihranite čas in energijo na koncu.