Merjenje kinetike encimov
Kot malo ozadja so encimi proteini, ki delujejo kot katalizatorji pri zmanjševanju količine aktivacijske energije za reakcijo. Aktivacijska energija je energija, ki je potrebna, da se reakcije začnejo, ker se številne reakcije ne pojavijo zelo hitro (ali se pojavijo sploh), če so termodinamično možne.
Encimi katalizirajo specifične reakcije na določenem mestu (znano kot aktivno mesto), kjer se reaktanti vežejo in reagirajo, da proizvajajo proizvode. Podlage imajo aktivna mesta, ki so specifična le za njih, tako da nobena druga snov ne veže ali reagira na isti lokaciji. Kot ključavnica in ključ vsak encim katalizira le eno specifično reakcijo (z nekaterimi izjemami).
Posebna aktivnost se uporablja v metodah izolacije beljakovin, da se navede odstotek očiščenja. Pomembno je vedeti, da ta enota pri nakupu encimov natančno pove, koliko čistega encima imate.
Pri merjenju kinetike encimov (hitrost reakcije encima s substratom ali površino) je specifična aktivnost opredeljena kot količina substrata, ki ga encim pretvori (reakcijske katalizirane) na mg proteina v encimskem pripravku na enoto časa.
Primer specifične dejavnosti bi bil:
- Specifično aktivnost izoliranega encima smo izmerili pri 150 umolih / min / mg proteinov pred čiščenjem in 800 umolov / min / mg, po čiščenju.
Specifična aktivnost je pomembno merilo čistosti encima. Različne serije čistega encima bi morale imeti enake vrednosti in tudi redčenje encimske raztopine bodo imele večkrat enake specifične vrednosti aktivnosti, čeprav bodo imele različne vrednosti encimske aktivnosti. To se zgodi zato, ker pri izračunu specifične aktivnosti enačbo prizadenejo števec (enote / ml) in imenovalec (mg / ml).
Posebna dejavnost je zelo različna od aktivnosti, vendar je izračun specifične dejavnosti še vedno odvisen od vrednosti dejavnosti. To pomeni, da bo navedena specifična vrednost aktivnosti odvisna tudi od opredelitve encimske enote.
Paketi encimov, katerih vrednost specifične aktivnosti je nižja od pričakovane, lahko vsebujejo molekule encimov, ki so se spremenili ali zmešali z nečistočami.
Dejavniki, ki vplivajo na aktivnost encimov
Možno je, da ima en encim morda različne izmerjene vrednosti aktivnosti, merjene v različnih laboratorijih (to so dejanske razlike v merjeni aktivnosti, ne očitne razlike, ki jih povzroča uporaba različnih opredelitev enote).
Način izvajanja analize (metoda preskušanja za določitev čistosti encimov) bo vplivala na navedene vrednosti aktivnosti. Na primer, encimi so na splošno bolj aktivni med temperaturami 37 stopinj Celzija v primerjavi s 20 stopinj Celzija, tako da če se preskus opravi pri 21 stopinjah Celzija, se bodo vrednosti razlikovale od preskusov, opravljenih pri temperaturi 32 stopinj Celzija (običajno , testi potekajo pri temperaturi med 20-37 stopinj Celzija).
Tako bi bila opredelitev encimske enote bolje izražena kot 1 enota (U) količina encima, ki katalizira reakcijo 1 nmol substrata na minuto v standardnih pogojih.