Liofilizacija ali sušenje z zamrzovanjem je kratek laboratorijski postopek
Osnove liofilizacije
Eden najboljših načinov za shranjevanje bakterijskih, glivičnih, kvasovk ali drugih mikroorganizmov v daljšem časovnem obdobju je uporaba postopka liofiliziranja. Ta kratek laboratorijski postopek lahko izvedete s komercialno dostopnim zamrzovalnikom, ki bo ohranil vašo zbirko kulture. Ker je liofilizacija najbolj kompleksna in draga oblika sušenja, je postopek običajno omejen na občutljive, toplotno občutljive materiale visoke vrednosti. Snovi, ki jih zamrzovanje ne poškoduje, se lahko ponavadi liofilizirajo, tako da hlajenje ni potrebno.
Ta proces lahko traja kar tri ure in traja 24 ur, ne pa tudi čas kulture.
Postopek liofilizacije po korakih
Najprej razvijemo kulturo čez noč ali travo mikroorganizma na LB ali drugih ustreznih agarnih ploščah hranil.
Nato pripravite sterilne viale za zamašitev z avtoklaviranjem pred časom, pri čemer so zgornje kape (gumijasti zamaški) nameščeni na vrhu. Postavite papirne nalepke, natisnjene z identifikacijo kulture v cevi pred avtoklaviranjem. Druga možnost je uporaba cevi s kape, namenjenimi za sterilnost .
Na ploščo dodajte 4 ml liofilizacijskega puferja. Če je potrebno, se lahko celice prekinejo s sterilnim steklenim drogom.
Hitro prenesite suspenzijo za kulturo v sterilizirane viale. Dodajte približno 1,5 ml na vialo. Zatesnite z gumijastim pokrovčkom.
Zamrznitev suspenzije za kulturo v vialah zamrzujte tako, da postavite viale v zamrzovalnik -20 stopinj Celzija.
Ko so kulture zamrznjene, pripravite sušilec za lase z vklopom in omogočite, da se stabilizira ustrezna temperatura in pogoji vakuuma. To storite v skladu z navodili proizvajalca za določeno znamko zamrzovalnika, ki ga uporabljate.
Previdno in aseptično postavite pokrovce viale na vrhu viale, tako da se med postopkom sušenja z zamrzovanjem lahko izogne vlagi in viale postavite v komoro za zamrzovanje. Namestite vakuum na komoro v skladu z navodili proizvajalca.
Pustite, da se kultura popolnoma liofilizira (izsuši). To lahko traja od nekaj ur do prenočitve, odvisno od količine vsakega vzorca in števila vzorcev, ki jih imate.
Odstranite vzorce iz komore za zamrzovanje v skladu s proizvajalčevimi navodili in takoj zataknite viale z gumijastimi pokrovi, nato pa z zgibnimi vrhovi.
Shranjujemo liofilizirano zbirno kulturo pri sobni temperaturi.
Izdelki, ki jih boste potrebovali
- Zamrzovalnik
- Hranljive ali druge ustrezne agarne plošče (in inkubatorja za gojenje kulture)
- Stekleni drog
- Liofilizacijski pufer
- Viale z zgornjim robom z gumijastimi zamaški (in zamaškom za nanašanje kapic)
- Zamrzovalnik
Referenca:
SP znanstveni. Osnovna načela sušenja z zamrzovanjem. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/