Osnove liofilizacijskih kulture (liofilizacija)
Liofilizacija, znana tudi kot liofiliziranje, je postopek, ki se uporablja za ohranjanje biološkega materiala z odstranitvijo vode iz vzorca, ki vključuje prvo zamrznitev vzorca in nato sušenje pod vakuumom pri zelo nizkih temperaturah. Liofilizirani vzorci se lahko shranijo veliko dlje kot neobdelani vzorci.
Zakaj se uporablja liofilizacija?
Liofilizacija ali zamrznitev sušenja bakterijskih kultur stabilizira kulture za dolgoročno shranjevanje in zmanjšuje škodo, ki jo lahko povzroči strogo sušen vzorec.
Mnogi mikroorganizmi dobro preživijo, ko so liofilizirani in jih je mogoče enostavno rehidrirati in gojiti v kulturah, po daljšem časovnem skladiščenju.
Liofilizacija se uporablja tudi v biotehnološki in biomedicinski industriji za ohranjanje cepiv, vzorcev krvi, prečiščenih beljakovin in drugega biološkega materiala.
Ta kratek laboratorijski postopek lahko uporabite s katerim koli komercialno dostopnim zamrzovalnim sušilcem za ohranitev zbirke kulture.
Proces liofilizacije
Postopek liofilizacije je dejansko uporaba fizičnega pojava, imenovanega sublimacija: prehod snovi iz trdnega v plinasto stanje, ne da bi najprej prešli skozi tekočo fazo. Med liofilizacijo se voda v zamrznjenem vzorcu odstrani kot vodna para, ne da bi se najprej odmrl vzorec.
Pogoste napake
Ena najpogostejših napak pri liofilizaciji ni poznavanje tališča v vzorcu, zaradi česar je težko izbrati pravi liofilizator.
Vaši vzorci se lahko med procesom topijo. Še ena pogosta napaka je razmišljanje, da je hladnejši pri zamrznjenem sušenju na sušilniku za zamrzovanje. Pri primarnem sušenju morate nastaviti temperaturo na tleh pod temperaturo evtektike vzorca. Za spodbujanje molekul vzorca se mora gibati dovolj toplote - vendar preprečiti taljenje.
Tretja napaka je uporaba napačne opreme za vaše vzorce. Ker se v določeni skupini uporabljajo liofilizatorji, morate pred nakupom znati naslednje:
- Koliko vlage se liofilizira
- Kakšen je vzorec (in eutektična temperatura)
- Kako pravilno uporabiti sušilec za zamrzovanje
Če se enota ne uporablja pravilno, bi lahko uničila vse vzorce. Kar nas pripelje do druge pogoste napake: ne vzdržujemo vakuumske črpalke. Črpalka mora biti v odličnem delovnem stanju za liofilizacijo. Črpalka s plinsko predstikalno napravo, ki je odprta 30 minut pred in po postopku zamrznitve, se bo povečala življenjska doba črpalke. Odpiranje plinske balastne črpalke izprazni onesnaževalce iz črpalke, da se prepreči poškodovanje notranjih komponent. Olje črpalke pogosto preverite za razbarvanje in delce ter po potrebi zamenjajte olje. Redno menjavanje olja ohranja črpalko med optimalnim vakuumom med postopkom zamrzovanja.
Nazadnje, ob napačnem sušenju za liofilizacijo je lahko tudi velika napaka. Potrebujete vzorec zamaška pod vašim vakuumom? Nato je potrebna zapiralna komora. Ali ste v bučah zamrznjeni? Potem se prepričajte, da imate sušilno komoro z pristanišči.
Z izogibanjem zgornjim napakam lahko zagotovite boljšo skrb za sušilec za zamrzovanje in črpalko ter imeli boljše vzorce, ko se izvede vaša zamrznitev.
Reference
Labconco News. "Top 5 napak v postopku liofilizacije." http://www.labconco.com/news/top-5-lyophilization-mistakes