Tehnologija, imenovana tudi RFLP analiza, izkorišča polimorfizme v genetskih kodah posameznikov. Čeprav imajo vsi člani vrste v bistvu enak genetski sestavek, te majhne razlike prihajajo do razlik v fenotipu, na primer pri videzu ali metabolizmu med posamezniki.
RFLP: Tehnična analiza in aplikacije
Metoda RFLP analize vključuje rezanje določene regije DNA z znano variabilnostjo z restrikcijskimi encimi, nato ločevanje fragmentov DNA z elektroforezo agaroznega gela in določanje števila fragmentov in relativnih velikosti.
Restrikcijski encim je encim, beljakovinska molekula, ki rezani DNA na restriktivnih mestih. V bistvu se vzorec DNK razgradi in prebavi z restrikcijskimi encimi. Nastali fragmenti so ločeni glede na njihove dolžine in vzorec velikosti fragmentov se bo razlikoval za vsakega posameznega, ki je bil testiran.
Celoten postopek RFLP zahteva označevanje sonde, razdrobljenost DNA, elektroforezo, blotiranje, hibridizacijo, pranje in avtoradiografijo. Detektirani RFLP se vizualizira z rentgenskim filmom v avtoradiografiji, kjer se lahko fragmenti DNA pregledajo in analizirajo, potem ko so ločeni drug od drugega z elektroforezo.
Nekatere aplikacije za analizo RFLP vključujejo:
- DNA prstni odtis . Forenzični znanstveniki lahko uporabljajo RFLP analizo za prepoznavanje osumljencev na podlagi dokazov, zbranih na prizoriščih kaznivih dejanj.
- Očetovstvo. RFLP se uporablja tudi pri določanju očetovstva ali za sledenje prednikov.
- Genetska raznolikost. Tehnika se lahko uporablja pri proučevanju razvoja in migracije prosto živečih živali, proučevanju vzorcev vzreje v živalskih populacijah ter odkrivanju in diagnostiki določenih bolezni.
Tehnika uporabe RFLP odkrivanja sprememb v genomih je bistveno orodje pri kartiranju genoma in analizi genetskih bolezni. Če se v določenem kromosomu išče lokacijo določenega gena bolezni, bodo raziskovalci analizirali DNA članov družine z boleznijo, potem pa iskali podobne vzorce dedovanja v alelih RFLP.
Ko je genska bolezen lokalizirana, izvajanje RFLP analize na drugih družinskih članih lahko razkrije nosilca mutantnih genov ali signalizira splošno tveganje za bolezni. Pomembno je omeniti, da se tehnika RFLP trenutno ne uporablja široko, saj se za analizo DNA v forenzični znanosti in na več drugih področjih uporabljajo novejše, robustnejše tehnike.
Negativni vidik analize
Na žalost je tehnika RFLP analize dolgočasna in počasna. Poleg zahtevanja velike količine vzorčne DNA - vzorec bi moral biti običajno približno velikost četrtine, ki je razmeroma velika za vzorce DNK - postopek, od označevanja sonde do pranja in avtoradiografije, lahko traja do poln mesec, da izpolni.
Rezultati projekta Human Genome so precej nadomestili potrebo po RFLP. Projekt je omogočil določitev celotnega zaporedja DNK, ugotovljene v človeških celicah, človeškem genomu in za identifikacijo vseh genov v človeškem genomu.